Государственная фармакопея Республики Беларусь -
Скачать (прямая ссылка):
4. Атомно-абсорбционная спектрометрия (2.2.23)
Метод атомно-абсорбционной спектрометрии (ААС) применяют для испытаний по определению содержания отдельных элементов, присутствующих в образце.
4.1. Специфичность. Специфичность данного метода определяется тем, что атомы анализируемого элемента поглощают характеристическое излучение от источника со строго дискретными длинами волн, соответствующими данному элементу. Однако возможны помехи вследствие как оптических, так и химических эффектов. Перед началом валидации необходимо выявить помехи такого рода и, если возможно, снизить их влияние путем использования соответствующих приемов.
Эти помехи могут привести к систематической погрешности при использовании метода прямой калибровки или к изменению чувствительности метода. Основ-
ным источником погрешности в методе ААС являются погрешности, связанные с процессом калибровки и мешающим влиянием матрицы.
4.2. Градуировка. Использование линейной модели градуировки описано в общей статье 2.2.23 «Атомно-абсорбционная спектрометрия». Для доказательства применимости линейной регрессионной модели рекомендуется использовать не менее пяти градуировочных растворов. В некоторых случаях возможно использование параболической модели градуировки. При этом также используют не менее пяти градуировочных растворов. Рекомендуется использовать концентрации градуировочных растворов с равномерным распределением внутри диапазона применения.
Для каждой концентрации рекомендуется выполнять не менее пяти измерений.
Проблемы с калибровкой часто могут быть выявлены визуально. Однако градуировочные графики сами по себе нельзя использовать как доказательство пригодности метода калибровки. Калибровочный график представляют в следующем виде:
а) на графике откладывают измеренные оптические плотности как функции концентраций и строят кривую, описывающую эту градуировочную функцию, вместе с ее доверительными интервалами. Экспериментальные точки должны находиться в пределах доверительного интервала построенного графика.
б) на графике откладывают остаточные отклонения (разности между измеренными и вычисленными по градуировочному графику оптическими плотностями) как функции концентрации. Эти разности должны распределяться вокруг оси абсцисс случайным образом.
В некоторых случаях разброс значений сигнала возрастает с ростом концентрации, что может быть выявлено из графика остаточных отклонений или статистическими методами. При этом наибольшая точность может быть достигнута при использовании градуировки с весовыми множителями. Может быть применена как линейная, так и квадратичная весовая функция.
В случае использования весовой модели строится график взвешенных разностей (т.е. разностей, умноженных на веса) как функции концентрации следующим образом:
а) на графике откладывают измеренные оптические плотности как взвешенные функции концентраций и строят кривую, описывающую эту градуировочную функцию вместе с ее доверительными интервалами.
б) на графике откладывают взвешенные остаточные отклонения (т.е. взвешенные разности между измеренными и вычисленными по градуировочному графику оптическими плотностями) как функции концентрации.
Необходимо показать, что модель достаточно точно описывает экспериментальные данные.
4.3. Эффекты матрицы. Если для получения градуировочной функции используют метод градуировочного графика, то необходимо показать, что чувствительность для раствора анализируемого образца и градуировочных растворов одинакова.
Если применяется градуировка в виде прямой линии, различия в чувствительности могут быть обнаружены путем сравнения наклонов градуировочного графика, полученного с использованием эталонных растворов, и растворов, полученных внесением стандартной добавки к испытуемому раствору. Точность оценки наклонов обеих прямых зависит от числа и распределения точек измерения. По-
этому для построения обоих регрессионных линий рекомендуется использовать достаточное число точек (не менее пяти) и выбирать концентрации преимущественно на границах диапазона градуировки.
Обоснованием для возможности использования метода градуировочного графика является незначимость различий наклонов полученных прямых по критерию Стьюдента. Если различия значимы, то используют метод стандартных добавок.
4.4. Предел обнаружения и предел количественного определения (метод, основанный на стандартном отклонении контрольного опыта - см. 7.3.1 и 8.3.1, раздел В). Выполняют контрольные опыты, для которых предпочтительно использовать растворы «плацебо», содержащие все компоненты образца, за исключением определяемого. Если такие контрольные опыты выполнить невозможно, то допустимо использовать холостые растворы, содержащие все реагенты и приготовленные так же, как и испытуемый раствор.
5. Разделительные методы
5.1. Хроматографические методы. Различные хроматографические методы могут использоваться для идентификации, контроля примесей и количественного определения. Ниже описаны особенности валидации данных методов.
